КАТЕГОРИИ:


Астрономия- (809) Биология- (7483) Биотехнологии- (1457) Военное дело- (14632) Высокие технологии- (1363) География- (913) Геология- (1438) Государство- (451) Демография- (1065) Дом- (47672) Журналистика и СМИ- (912) Изобретательство- (14524) Иностранные языки- (4268) Информатика- (17799) Искусство- (1338) История- (13644) Компьютеры- (11121) Косметика- (55) Кулинария- (373) Культура- (8427) Лингвистика- (374) Литература- (1642) Маркетинг- (23702) Математика- (16968) Машиностроение- (1700) Медицина- (12668) Менеджмент- (24684) Механика- (15423) Науковедение- (506) Образование- (11852) Охрана труда- (3308) Педагогика- (5571) П Arhitektura- (3434) Astronomiya- (809) Biologiya- (7483) Biotehnologii- (1457) Военно дело (14632) Висока технологиите (1363) Geografiya- (913) Geologiya- (1438) на държавата (451) Demografiya- ( 1065) Къщи- (47672) журналистика и SMI- (912) Izobretatelstvo- (14524) на външните >(4268) Informatika- (17799) Iskusstvo- (1338) История- (13644) Компютри- (11121) Kosmetika- (55) Kulinariya- (373) култура (8427) Lingvistika- (374) Literatura- (1642) маркетинг-(23,702) Matematika- (16,968) инженерно (1700) медицина-(12,668) Management- (24,684) Mehanika- (15423) Naukovedenie- (506) образование-(11,852) защита truda- (3308) Pedagogika- (5571) п Политика- (7869) Право- (5454) Приборостроение- (1369) Программирование- (2801) Производство- (97182) Промышленность- (8706) Психология- (18388) Религия- (3217) Связь- (10668) Сельское хозяйство- (299) Социология- (6455) Спорт- (42831) Строительство- (4793) Торговля- (5050) Транспорт- (2929) Туризм- (1568) Физика- (3942) Философия- (17015) Финансы- (26596) Химия- (22929) Экология- (12095) Экономика- (9961) Электроника- (8441) Электротехника- (4623) Энергетика- (12629) Юриспруденция- (1492) Ядерная техника- (1748) oligrafiya- (1312) Politika- (7869) Лево- (5454) Priborostroenie- (1369) Programmirovanie- (2801) производствено (97182) от промишлеността (8706) Psihologiya- (18,388) Religiya- (3217) с комуникацията (10668) Agriculture- (299) Sotsiologiya- (6455) спортно-(42,831) Изграждане, (4793) Torgovlya- (5050) превозът (2929) Turizm- (1568) физик (3942) Filosofiya- (17015) Finansy- (26596 ) химия (22929) Ekologiya- (12095) Ekonomika- (9961) Telephones- (8441) Elektrotehnika- (4623) Мощност инженерно (12629) Yurisprudentsiya- (1492) ядрена technics- (1748)

Инсулин. Лекция 13. Генетично инженерство лекарства за медицински цели

Лекция 13. Генетично инженерство лекарства за медицински цели

метаногени

В групата на микроорганизми, способни да използват въглероден диоксид като терминал електронен акцептор при окислението на молекулен водород - е метаногени.

Предположението на бактериалната произхода на CH 4 е направена през 19-ти век. Въпреки това, изясняване на този въпрос е било забавено поради невъзможността да се изолира чиста култура. Това доведе до техниките за обработка разработени анаеробно Hungate:

1) Принцип на отстраняването на кислород от газа;

2) предварителен носител за възстановяване.

Метаногенните бактерии - са морфологично много разнообразна група, обединени от две общи характеристики:

1) строг анаеробиоза;

2) способността да образува метан.

Barker, Н. A. (1956), приета като доминираща образуването черта на СН4. Юнайтед в 3 вид Methanobaciaceae семейство (тъй като те са в Берга). Сега разпределят 7 родове и 10 видове в чиста култура: Methanosarcina, Methanospirillum, Methanobacterium, Methanogenium .

Специфичността на групата - в клетъчните стени не е muramic киселини и D-аминокиселини. Клетъчната стена е от три вида:

1) пептидогликан специална химическа структура - psevdomurein;

2) на протеинови глобули на;

3) хетерополизахариден природата.

Под електронен микроскоп, е в близост до Грам-положителни. Lipid специфичност с това, че са изградени от полярен липид и етери: от глицерол и С 20 алкохол. Не естери.

Замяна на продукти под формата на гранули от поли-β-oksimaslyannoy киселина или гликоген намерени.

Най има температурен оптимум при 35
40 ° С, но има 65-70 ° С и 20-25 ° С Всички неутрофили: рН = 6-8.
Като източник на въглерод се използва най-
въглероден диоксид, някои формиат, метанол, етилацетат.
2 + СО 2 → CH 4 + 2Н

Значителен принос за развитието на съвременната фармакология въведена рекомбинантна ДНК технология, използвайки техниките на генното инженерство. Чрез щамове на E.coli, дрожди, култивирани растителни или животински клетки са използвани за производство на хормони, повечето от известните ензими, антивирусни ваксини, и т.н.

Инсулин - панкреатичен хормон, който регулира въглехидратния метаболизъм и поддържа нормални нива на кръвната захар. Инсулиновата молекула, съставен от две полипептидни вериги, съдържащ 51 аминокиселинни остатъци: А-верига, състояща се от 21 аминокиселинни остатъци, В-верига е образувана от 30 аминокиселинни остатъци. Две полипептидни вериги, свързани чрез дисулфидни връзки чрез цистеинови остатъци, трета дисулфидна връзка намира в А-веригата. Инсулинът се синтезира като едноверижен прекурсор - препроинсулин, съдържаща краен сигнален пептид (23 аминокиселинни остатъци) и 35 улцерозен свързващ пептид (С-пептид). При отстраняване на сигналния пептид на проинсулин от клетката 86 се формира от аминокиселинни остатъци, в които А и В вериги са свързани към С-пептид, като им с необходимата ориентация за затварянето на дисулфидни връзки. След ензимното отцепване на С-пептид се произвежда инсулин.



Първичната структура на инсулин от различни видове варира до известна степен като различни, и неговото значение в регулирането на въглехидратния метаболизъм. Най-подобен на човешкия инсулин е свински, който се различава от това от само един аминокиселинен остатък 30 позиция свински инсулин В-верига е аланин, както и в човешки инсулин - треонин; Говежди инсулин се различава от три аминокиселинни остатъци.

Свине и говежди инсулин може да се използва за лечение на хора. Въпреки това, с течение на времето, в някои случаи при хора започват да се изгради антитела към говеда и свине, инсулин, което води до нежелани алергични реакции. Още повече, че поради необходимостта от формулирането на инсулина не могат да бъдат покрити с животински инсулин поради ограничената база ресурс.

С появата на рекомбинантна ДНК технология за първи път стана възможно да се произвежда инсулин в голям мащаб. В 1978 гр. Отделните вериги на човешки инсулин чрез експресирането им в синтетичния ген в E.coli клетки са синтезирани. Всеки от получените синтетичния ген беше настроен към 3'-края на гена на ензима β-галактозидаза и се въвежда в плазмида pBR322 вектор. E.coli клетки, трансформирани с такива рекомбинантни плазмиди произведени хибридни (химерни) протеини, състоящи се от фрагмент от β-галактозидаза и А или Б инсулин пептид свързан към него, по метионинов остатък. При обработка на химерен протеин, пептид bromtsianidom освободен. Въпреки това, затварянето на дисулфидни моста щеше да работи.

В 80-те години на XX век американската компания Genentech разработена технологията на производство на генно инженерство човешки инсулин (Geach), който по-късно е комерсиализиран корпорация Eli Lilly. В момента годишното производство на активни фармацевтични съставки (API) инсулин света надвишава 15,000 кг.

невропептиди

През 1978 г. на Института за Bioorganic Chemistry беше синтеза на две структурни гени, кодиращи невропептиди левцин-енкефалин и брадикинина. Синтезиран ген левцин-енкефалин имаше две "лепкава" край. Полученият синтетичния ген се вкарва заедно с ДНК фрагмент, съдържащ бактериален промотор и част от гена β-галактозидаза протеин на Ешерихия коли, плазмид PBR 322 и EcoRI рестрикционен ензим третира смес и BamH 1. Полученият рекомбинантен плазмид се трансформира в клетки на Е. Coli. В резултат на експресията на вмъкнатия ген бактерията започва да се получи слят протеин, състоящ се от N-терминална част на β-галактозидаза, и С-края - невропептид последователност. С цианоген бромид rasscheplali химерен протеин, за да се получи активна левцин-енкефалин.

соматостатин

Различни модификации на интерферон са създадени, адаптиран за лечението на определени вирусни инфекции. Например, хибрид интерферон гама-повърхностно активно вещество-асоцииран протеин, насочено срещу белодробна болест.

Белодробно повърхностно активно вещество - вещество, освободено alveolocytes втори тип е комплекс от фосфолипиди и специфични повърхностно-свързани протеини, повърхността на лигавицата алвеолите. Основни протеини са белодробно повърхностно активни протеини, А, В, С и D. протеини В и С (SP-B и SP-C) - хидрофобни протеини, участващи в разпространението и стабилизиране на филма повърхностно активно вещество върху повърхността на алвеолите. Тези две протеини играят роля в повърхностно активни свойства. Протеини А и D (SP-A и SP-D) - хидрофилни протеини с предпазни и транспортни функции.

Основното свойство на белодробен сърфактант е да се намали повърхностното напрежение в белодробните алвеоли, и по този начин се улесни процеса на вдишване и издишване. Аномалии в системата на белодробен сърфактант допринасят значително за патогенезата на много заболявания, включително синдром на респираторен дистрес деца и възрастни, на тежка пневмония, белодробна туберкулоза, термохимични изгаряния на дихателните пътища, силикоза, и много други.

Основан генното инженерство структура, в която обединените гама-интерферон гени и белодробен сърфактант C - гама интерферон-повърхностно свързан протеин С (IFN-SP-C). Слетият протеин може да намери приложение при лечението на белодробна туберкулоза, тежка пневмония, термохимични изгаряния на дихателните пътища, силикоза, синдром на респираторен дистрес при възрастни или други белодробни заболявания. Изобретението дава възможност за целенасочено доставяне към белите дробове известни имуномодулатор интерферон гама използвайки повърхностно С. Предимството на IFN-SP-C е наличието на C аналози протеин ПАВ, които се използват за лечение и профилактика на белодробни заболявания, свързани с нарушения в белодробен сърфактант рекомбинантен плазмид, съдържащ ДНК последователност, кодираща слят протеин IFN-SP-C, под контрола на трп промотор pBEU-IFN-SP-C се трансформира в Е. coli, и се характеризира чрез рестрикционен ензимен анализ и секвениране. IFN-SP-C слят протеин се изолира от бактериалната маса под формата на включени тела и се пречиства чрез препаративна електрофореза в полиакриламиден гел. Неговата структура е доказано правилно чрез масова спектрометрия MALDI-TOF-и С-крайно секвениране.

Схема рекомбинантен плазмид pBEU-IFN-SPC. В схема определен: черна стрелка - BLA на гени и тет, определящ резистентност към антибиотици, устойчивост спрямо ампицилин и тетрациклин (Tet ген е инактивиран в плазмид); гени представител А, COP, TNP R, контролиране на цикъл-далеч репликацията; сив стрелка - трп промотор; сив сектор - генна последователност интерферон-гама, черен - сДНК HSP-С; маркирани ограничение ензимни места за разпознаване на някои.

<== предишната лекция | Следващата лекция ==>
| Инсулин. Лекция 13. Генетично инженерство лекарства за медицински цели

; Дата на добавяне: 07.01.2014; ; Отзиви: 111; Нарушаването на авторски права? ;


Ние ценим Вашето мнение! Беше ли полезна публикува материал? Да | не



ТЪРСЕНЕ:


Вижте също:



ailback.ru - Edu Doc (2013 - 2017) на година. Не е авторът на материала, и предоставя на студентите възможност за безплатно обучение и употреба! Най-новото допълнение , Ал IP: 11.45.9.26
Page генерирана за: 0.049 сек.