КАТЕГОРИЯ:


Астрономия- (809) Биология- (7483) Биотехнологии- (1457) Военное дело- (14632) Высокие технологии- (1363) География- (913) Геология- (1438) Государство- (451) Демография- (1065) Дом- (47672) Журналистика и СМИ- (912) Изобретательство- (14524) Иностранные языки- (4268) Информатика- (17799) Искусство- (1338) История- (13644) Компьютеры- (11121) Косметика- (55) Кулинария- (373) Культура- (8427) Лингвистика- (374) Литература- (1642) Маркетинг- (23702) Математика- (16968) Машиностроение- (1700) Медицина- (12668) Менеджмент- (24684) Механика- (15423) Науковедение- (506) Образование- (11852) Охрана труда- (3308) Педагогика- (5571) Полиграфия- (1312) Политика- (7869) Право- (5454) Приборостроение- (1369) Программирование- (2801) Производство- (97182) Промышленность- (8706) Психология- (18388) Религия- (3217) Связь- (10668) Сельское хозяйство- (299) Социология- (6455) Спорт- (42831) Строительство- (4793) Торговля- (5050) Транспорт- (2929) Туризм- (1568) Физика- (3942) Философия- (17015) Финансы- (26596) Химия- (22929) Экология- (12095) Экономика- (9961) Электроника- (8441) Электротехника- (4623) Энергетика- (12629) Юриспруденция- (1492) Ядерная техника- (1748) Arhitektura- (3434) Astronomiya- (809) Biologiya- (7483) Biotehnologii- (1457) Военни бизнесмен (14632) Висока technologies- (1363) Geografiya- (913) Geologiya- (1438) на държавата (451) Demografiya- ( 1065) Къща- (47672) журналистика и смирен (912) Izobretatelstvo- (14524) външен >(4268) Informatika- (17799) Iskusstvo- (1338) историята е (13644) Компютри- (11,121) Kosmetika- (55) Kulinariya- (373) културата е (8427) Lingvistika- (374) Literatura- (1642) маркетинг-(23702) математиците на (16968) Механична инженерно (1700) медицина-(12668) Management- (24684) Mehanika- (15423) Naukovedenie- (506) образователна (11852) truda- сигурност (3308) Pedagogika- (5571) Poligrafiya- (1312) Politika- (7869) Лево- (5454) Priborostroenie- (1369) Programmirovanie- (2801) производствено (97 182 ) индустрия- (8706) Psihologiya- (18388) Religiya- (3217) Svyaz (10668) Agriculture- (299) Sotsiologiya- (6455) на (42831) спортист строително (4793) Torgovlya- (5050) транспорт ( 2929) Turizm- (1568) физик (3942) Filosofiya- (17015) Finansy- (26596) химия (22929) Ekologiya- (12095) Ekonomika- (9961) Electronics- (8441) Elektrotehnika- (4623) Мощност инженерно ( 12629) Yurisprudentsiya- (1492) ядрена technics- (1748)

Изолиране на чиста култура от анаеробни бактерии




Методи за изолиране на чисти култури от анаероби.

· Метод Tseysslera. Екземпляр сеят удари над повърхността на гъста среда. Създаване на анаеробни условия. И 24-72ch инкубират при 37 градуса. Изолирани колонии са рекултивирани в анаеробна среда на стерилитет или контролна среда Kitty Tarotstsi.

· Метод Уайнбърг. Няколко капки от изпитвания материал в тръбата с 4-5ml изотоничен разтвор. Разбърква се запечатва капилярната прехвърля в епруветка с охладени до 45-50 градуса захар агар дифузен висока колона. След разбъркване, посява със същите две повече капилярни тръби с агар и захар се охлажда бързо с течаща вода. Извеждането на преден дълбоки колонии се култивират върху среда или SCS Kitty Tarotstsi.

· Метод Перец. Зарибителен материал Подгответе, както е описано по-горе. Съдържанието на епруветките с подходящо разреждане се излива в петриевата паничка, на дъното на което се намира на две пръчки 6h6sm стъклена плоча. Сряда е изпълнен така, че да запълни пространството между плочата и на дъното на чашата. Когато плоча на растеж се повдига и чисти пасажиранй колонии.

5 методи за идентифициране на чисти култури:

стъпки за изолиране на чисти култури от аеробни бактерии:

1 - макро и микроскопско изследване на материал и засяването на твърда хранителна среда, за да се получи изолирани колонии.

2 - макро и микроскопско изследване на колониите и ги презасяване на наклон, за да се получи чиста култура;

3 - проверка на чистотата на културата и неговата идентификация;

4 - сключване на културата за избор.

В лабораторна практика често се налага да работят с анаеробни микроорганизми. Те са по-прощава на хранителни среди от аероби, обикновено изискват растеж специални добавки изискват прекратяване на кислород по време на отглеждането им, тяхната продължителност растеж е по-дълъг. Тъй като с тях се работи по-трудно, изисква значително внимание бактериолози и лаборанти.

Важна е защитата на материал, който съдържа анаеробни патогени от токсичния ефект на атмосферен кислород. Тъй като материалът от джобовете на гнойни инфекции се препоръчва да се вземат по време на тяхното пункция със спринцовка, времето между вземането материал и засаждане на хранителната среда трябва да бъде възможно най-кратък.

Що се отнася до култивиране на анаеробни бактерии използват специални среди, които не трябва да съдържа кислород и имат ниска намаляване на окисляване потенциал (-20 -150 MV), неговият състав се прилага на показателите - резазурин, метиленово синьо, и други подобни, които реагират на промяната на този потенциал. Когато го възобнови растежа, безцветна форма на показатели се променят цветовите: ресазурин багрила среда розови, и метиленово синьо - в синьо. Такива промени демонстрират невъзможността за използване на медиите за отглеждане на анаеробни микроби.



Това помага за намаляване на Redox администрация в сряда не по-малко от 0.05% агар, който се увеличава вискозитета си намалява доставката на кислород. Това, от своя страна, също се постига с помощта на пресни (не по-късно от два часа след подготовка) и редуцира медийна култура.

Трябва да се отбележи, че в определен тип ферментация метаболизъм на анаеробни бактерии, те изискват по-богата на хранителни вещества и витамини среда. Най-често използвани сърдечно-съдовата и чернодробна мозъчни екстракти, екстракти от дрожди и соя, казеин gidrolitichny храносмилане, пептон, триптон. Задължително е да се добави растежни фактори, като например Tween-80, хемин, менадион, или хемолизирани цяла кръв.

Методи за създаване на анаеробни условия. Като се има предвид, че свободното молекулярен кислород е токсичен за obligately анаеробно култивиране бактерии задължително условие на такива микроорганизми е да се ограничи достъпът му. Съществуват редица методи (механични, физични), които позволяват да се осигури.

Физически методи. 1. да регенерира Преди инокулация на бактерии в културалната среда да се отстрани излишната разтворен кислород. За тази цел, средата се кипи в продължение на 15-20 минути на водна баня и след това бързо се охлажда до необходимата температура.

2. За да се предотврати proniknenya кислород в своята среда изсипва пласт от стерилен вазелин или течен парафин.

3. Колоната културална среда в тръбите трябва да бъде достатъчно висока (10-12 см). Кислородът, обикновено с дебелина difundiruet колоната на дълбочина 2 см за, защото по-малко благоприятни условия за отглеждане на анаеробни микроорганизми.

4. Евакуация заместително метод е да се използва анаеробно. Те са херметически затворени метални кутии или пластмаса, които помпата могат да бъдат заменени с кислород и инертен газ (хелий, азот, аргон). Възможно да се използва троен газова смес, състояща се от 80% азот, 10% въглероден диоксид и 10% водород. Понякога използването на природен газ се счита за приемлив. За усвояване на кислород, който остава в анаеробни, използвайки паладиеви катализатори. С цел да се двойка абсорбцията на вода с помощта на калциев хлорид, силикагел и други подобни, които са пуснати на дъното anaerostata.

Химични методи. 1. Използване на вещества, способни да абсорбират кислород. За тази цел, използване е приемливо решение алкална пирогалол. Така помисли абсорбиране вещество дейност: капацитет на 100ml херметичен съд, в който петритата се използват 1 г пирогалол и 10 мл разтвор на 2,5 N натриев хидроксид.

Kislorodosvyazyvayuschy ефект има и натриев хидросулфит (Na2S2O4). За свързване кислород lvozduha 1 в смес, която се състои от 100 мл пресен 20% разтвор на натриев 2 S 2 O 4 и 16 мл 50% калиев хидроксид.

2. Прилагане-разлагащи вещества. Като се има предвид, че ръстът на облигатни анаеробни бактерии се случва в среда с ниско ниво на потенциал за намаляване на окисляването, те специалните редуциращи агенти са добавени: цистеин (0,03-0,0,5%), тиогликолова киселина или натриев тиогликолат (0,01-0, 02%), натриев сулфид, аскорбинова киселина (0.1%), различни захари.

възобновителите функции могат да изпълняват парчета на паренхимни органи на животни (черен дроб, бъбреци, сърце) или дори растения (картофи, други кореноплодни култури).

Степента на усвояване на кислород или на степента на подновяване на средата се измерва или електрометрично или с помощта на показатели (Resazurin, неутрално червено, fenosafranin).

3. Използването на специални системи за генериране на газ, които ви позволяват да се създаде анокси условия vmikroanaerostatah, транспорт на найлонови торбички и други подобни. Един от най-често е система от "Газ Генериране Box". Тя включва химични водородни генератори (borogidrit натриеви) и въглероден диоксид (таблетки натриев бикарбонат и лимонена киселина) и паладиев катализатор, който абсорбира кислород.

Плаките се поставят в mikroanaerostat култури, дъното на което е слой на паладиев катализатор. Върхът на пакета "Газ Генериране Box" врязана с ножица и го поля с 10-15 мл вода. Опаковка vmikroanaerostati. След 15-20 минути в анаеробни условия се създават в него. Водородът, който се освобождава, реагира с кислорода, образувайки вода и въглероден двуокис, образуван чрез взаимодействие на натриев бикарбонат с лимонена киселина.

Биологични методи. 1. Метод Fortner. Методът се състои в ко-култура на един sredeaerobnih и анаеробни микроорганизми. Първо, изрязани ширини агар ивица до 0.5-1.0 см в чаши с диаметър от една страна засява с изпитвания материал, който съдържа анаеробни патогени, и от друга -. Микробите, които са показател за анаеробни условия (Serratia marcescens или "чудотворната пръчка") , Ръбовете на parafiniruyut на чаши или близо пластелина. След известно време на средна повърхност kakaerobnyh расте колонии и анаеробни микроби. В усвояването на кислород Serratia marcescens поражда бледо розови или безцветни колонии, и в нарушение на целостта - ярко червено. На другата половина на чашата расте колонии от анаеробни микроби.

2. метод Hannele ( "час стъкло"). Това е вид модификация на предишната. Материал, който съдържа анаеробни патогени, засети на повърхността на средата с диаметър 2-2,5 см. Върху него е обхваната от "час стъкло" изпълнен със слой от семена на marcescens на ИПП и Serratia. Aerobni микроби, поглъщащи кислород, създаване на благоприятни условия за растежа на анаеробни патогени.

Използването на високо специализирани лаборатории анаеробна специална техника, която включва използването на хранителна среда, с безкислородна Updater, и извършване на отглеждане peresevany атмосфера от инертен газ, въглероден двуокис и други подобни.

През последните години, създаден стационарни анаеробни кутии, които съдържат всичко необходимо да се създадат анаеробни условия на култивиране, включително термостати. Обикновено, тези клетки са пълни със смес от trikomponentnoyugazovoy. Бактериолог работи в камерата, докато външно, с помощта на гумени ръкавици, я монтира. Такова оборудване има неоспорими предимства, които се намират във факта, че напълно елиминира кислород контакт с изпитвания материал.